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專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC2640-50T/48S
更新時(shí)間：2024-07-09
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1527
010-50973130
產(chǎn)品分類
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果膠裂解酶（PL）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號: BC2640
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
工作液：將試劑一倒入試劑二于50℃水浴中溶解（期間可拿出振蕩數(shù)次）。該試劑易長菌，配制完成后可-20℃分裝保存，可保存12周。
產(chǎn)品說明：
果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分，催化果膠分子鏈的消除裂解。來源比較廣泛，主要來源于微生物，在食品加工工業(yè)中提高果汁產(chǎn)量方面有重要意義，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面也具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰，測定235nm下吸光度的上升來表示果膠裂解酶的活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
細(xì)胞、細(xì)菌或真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測。（細(xì)菌、真菌等難以數(shù)量計(jì)算的微生物也可以稱取0.1g 細(xì)菌/真菌沉淀來進(jìn)行前處理）
培養(yǎng)液：直接測定。
二、測定步驟
分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至235nm，蒸餾水調(diào)零。
操作表：(在1.5mL離心管中)
| 試劑名稱 | 測定管 | 空白管 |
| 工作液（μL） | 900 | 900 |
| 樣本（μL） | 100 | - |
| 蒸餾水（μL） | - | 100 |
| 充分混勻同時(shí)按下計(jì)時(shí)器，測定10s時(shí)235nm下的初始值A1，40℃反應(yīng)30min后再次測定吸光值A2，計(jì)算ΔA測定管=A2測定管-A1測定管，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。空白管只需做1-2次。 | ||
三、果膠裂解酶活性計(jì)算
按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷（V樣×Cpr）÷T=64.1×ΔA÷Cpr
按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 64.1×ΔA÷W
按照細(xì)菌、真菌貨細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（U/104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷（V樣×N÷V樣總）÷T= 64.1×ΔA÷N
按照培養(yǎng)液體積計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PL活性（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷V樣÷T= 64.1×ΔA
ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)，5200 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.001L；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；109：換算系數(shù)，1mol=109nmol；N：細(xì)胞數(shù)量，以萬計(jì)。
注意事項(xiàng)：
若A1測定管大于1.5或者ΔA大于0.5，將樣本粗酶液用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定。
建議一次測定不要測定過多樣本以免耽誤過多的酶促反應(yīng)時(shí)間。
空白管正常情況下變化不超過0.02。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.1g香蕉皮加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。之后按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA測定管= A2測定管-A1測定管=0.43-0.421=0.009，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0.217-0.217=0，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
PL活性（U/g 質(zhì)量）= 64.1×ΔA÷W=5.526 U/g 質(zhì)量。
取0.1g大腸桿菌沉淀加入1mL提取液冰浴超聲波破碎細(xì)胞，然后10000g，4℃離心10min，取上清置于冰上，之后按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA測定管=A2測定管-A1測定管=1.352-0.923=0.429，ΔA空白管= A2空白管-A1空白管=0.217-0.217=0，按照樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
PL活性（U/g 質(zhì)量）= 64.1×ΔA÷W=274.99 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2630/BC2635 果膠酶活性檢測試劑盒
BC3680/BC3685 原果膠含量檢測試劑盒
BC4150/BC4155 離子結(jié)合型果膠（ISP）含量檢測試劑盒
果膠裂解酶活性檢測試劑盒 果膠裂解酶活性檢測試劑盒
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