產(chǎn)品簡介
儲存條件
-20℃
3-磷酸甘油醛脫氫酶活性測試盒光合作用
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase(GAPDH) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S ; 25T/24S

產(chǎn)品型號：BC2210

更新時間：2024-04-15

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1866

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號: BC2210
規(guī)格: 25T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30 mL×1瓶	4℃保存
試劑一	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑二	液體25 mL×1瓶	4℃保存
試劑三	液體15 µL×1瓶	4℃保存

溶液的配制：

試劑三：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。根據(jù)用量按照試劑三:蒸餾水為3:100的體積比例充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，根據(jù)需要取一定的量37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）預熱10min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

產(chǎn)品說明：
GAPDH（EC1.2.1.12）催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關鍵酶，與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關，在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。

磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3-二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3-二磷酸甘油酸和NADH生成3-磷酸甘油醛、無機磷和NAD⁺，340nm處測定NADH的減少量可反映GAPDH活性的高低。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
血清（漿）：直接檢測。
二、測定步驟

分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
操作表：在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑：

試劑名稱	空白管	測定管
樣本（µL）		30
蒸餾水（µL）	30
試劑三（µL）	20	20
工作液（µL）	950	950
在1mL石英比色皿中分別加入上述試劑，充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1，迅速置于37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）水浴5min，拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2，計算ΔA測定管= A1測定-A2測定，ΔA空白管=A1空白-A2空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。（空白管只需做1-2次）

三、GAPDH酶活計算
1、按樣本蛋白濃度計算
酶活定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GAPDH酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=1072×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
酶活定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GAPDH酶活（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=1072×ΔA÷W
3、按照細菌或細胞數(shù)量計算
酶活定義：每10⁴個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GAPDH酶活（U/10⁴cell）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（500×V樣÷V樣總）÷T=2.14×ΔA
4、按照血清（漿）體積計算
酶活定義：每mL樣本每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GAPDH酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷V樣÷T= 1072×ΔA
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應體系總體積，0.001L；V樣：反應體系中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度需自行測定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間：5min；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬；10⁹：單位換算系數(shù)，1mol=10⁹nmol。
注意事項：

當A1小于0.8或ΔA大于0.7時，建議將樣本稀釋后再進行測定。
空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.01。

實驗實例：

取0.1g兔腎臟加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心20min，取上清置冰上，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.815-0.158=0.657，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.865-0.864=0.001，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.656，按樣本質(zhì)量計算酶活得：GAPDH酶活（U/g質(zhì)量）=1072×ΔA÷W=7032.32 U/g質(zhì)量。
取0.1g三葉草加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心20min，取上清置冰上，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=1.026-1.017=0.009，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.865-0.864=0.001，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.008，按樣本質(zhì)量計算酶活得：GAPDH酶活（U/g質(zhì)量）= 1072×ΔA÷W=85.76 U/g質(zhì)量。