bca法測蛋白濃度原理

bca法測蛋白濃度步驟步驟

標準曲線的繪制：反應體系

加樣：96孔板，第一列8個孔

PBS: 20ul  19ul   18ul   16ul   12ul   8ul   4ul   0ul

BSA :0ul   1ul     2ul    4ul    8ul   12ul  16ul  20ul

BCA:200ul  200ul  200ul  200ul  200ul 200ul  200ul  200ul

BCA需現(xiàn)配現(xiàn)用，比例為A:B為50:1

樣品需稀釋25倍或根據(jù)實際情況決定

37℃水浴箱中孵育半個小時，用酶標儀讀數(shù)

酶標儀設置：

選擇absorbance可見光吸光度，波長設置為562nM，濃度從低到高分別為0

0.025ug/ul，0.05ug/ul，0.1ug/ul，0.2ug/ul，0.3ug/ul，0.4ug/ul，0.5ug/ul，設置第一列為標準列，設置樣本及Blank對照。

讀出OD值后，繪制出標準曲線，然后根據(jù)樣本的OD值算出樣本濃度，標準曲線的R值越接近1，說明曲線擬合度越好。         

注意：BCA測定時，顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則每次都需要做標準曲線。樣品在20-2000ug/ml的濃度范圍內(nèi)有良好的線性關系，因此樣品濃度過高需適當稀釋。