PCR定量試劑盒的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實時的監(jiān)測。

　　

　　PCR熒光定量是一種非常敏感的檢測方法，但是實驗室經(jīng)常開展檢測工作，一旦實驗室管理和環(huán)境控制沒有執(zhí)行到位，就存在由于交叉污染出導(dǎo)致假陽性的風(fēng)險。

　　

　　PCR定量試劑盒檢測出現(xiàn)假陽性的常見原因：

　　

　　1、實驗室污染是導(dǎo)致假陽性結(jié)果

　　

　　實驗室如果長期檢測陽性樣本，擴(kuò)增產(chǎn)物中高濃度的目的片段很容易擴(kuò)散到空氣中并不斷累積導(dǎo)致氣溶膠污染。

　　

　　2、熒光定量PCR儀性能不佳導(dǎo)致翹尾

　　

　　某些熒光定量PCR儀性能不佳，在反應(yīng)后期出現(xiàn)非特異性翹尾峰。

　　

　　3、電壓不穩(wěn)導(dǎo)致的基線不穩(wěn)定

　　

　　電壓不穩(wěn)定，會導(dǎo)致擴(kuò)增基線不穩(wěn)定。另外，臨床實驗室停電風(fēng)險相對較高。建議這些實驗室配備UPS緊急電源。

　　

　　4、樣本或者氣泡干擾

　　

　　反應(yīng)體系中存在氣泡或者某些樣本含有特殊成分可能干擾實驗，產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增曲線，這種擴(kuò)增曲線通常不呈現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線形態(tài)。

　　

　　5、定量試劑盒污染或者非特異性反應(yīng)

　　

　　某些試劑盒沒有在GMP車間進(jìn)行生產(chǎn)，或者GMP車間生產(chǎn)過程中車間潔凈度不夠或人員操作不規(guī)范，在試劑盒生產(chǎn)過程中可能出現(xiàn)陽性核酸片段或者質(zhì)粒污染反應(yīng)體系的情況。

　　

　　某些PCR定量試劑盒的生產(chǎn)工藝不過關(guān)，可能出現(xiàn)非特異性翹尾現(xiàn)象。試劑盒中引物、探針等原料品質(zhì)不過關(guān)，質(zhì)量控制不嚴(yán)格，也可能導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。