ELISA原理

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA）指將抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的有無(wú)深淺定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

ELISA常見(jiàn)分類(lèi)

ELISA常見(jiàn)問(wèn)題

A：ELISA實(shí)驗(yàn)終止后形成的是黃色物質(zhì)，該物質(zhì)需要在450nm處測(cè)定其吸光度，630nm的吸光度只是檢測(cè)板子本身的吸光度，與酶標(biāo)板的材質(zhì)有關(guān)，測(cè)OD630可以消除各個(gè)板孔不干凈等非特異性因素引起的誤差。如果所使用的酶標(biāo)儀不可以檢測(cè)OD630也沒(méi)有關(guān)系，只讀取OD450的結(jié)果也可以。

數(shù)據(jù)處理時(shí)所用的矯正值，是把所有孔的OD值減去標(biāo)準(zhǔn)曲線0濃度孔的OD值，進(jìn)一步計(jì)算結(jié)果。

A：CV值是統(tǒng)計(jì)學(xué)中的一個(gè)概念，中文是變異系數(shù)，可以認(rèn)為變異系數(shù)和極差、標(biāo)準(zhǔn)差和方差一樣，都是反映數(shù)據(jù)離散程度的值。CV值越小，說(shuō)明數(shù)據(jù)的波動(dòng)程度越小。在描述板內(nèi)、板間實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否一致時(shí)常用到CV值，其越小，說(shuō)明批內(nèi)及批間差越小，試劑盒質(zhì)量越好。

A：ELISA數(shù)據(jù)處理中所謂的“標(biāo)準(zhǔn)曲線”其實(shí)稱(chēng)為擬合曲線比較合適。標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式有多種，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對(duì)數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合，但都只適用于曲線的一部分，有的適用于前半段，有的適用于后半段，有的適用于中間一段，而四參數(shù)Logistic曲線擬合則對(duì)曲線的全部都有較好的適用性。目前上的免疫檢測(cè)擬合方式是“四參數(shù)Logistic擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系，從而進(jìn)一步比較正確地獲得樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度值。

建議用專(zhuān)門(mén)的軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，這樣可以快速、準(zhǔn)確地計(jì)算出結(jié)果。

A：ELISA試劑盒嚴(yán)格區(qū)分種屬，一般不推薦跨種屬檢測(cè)，不同種屬的同一個(gè)指標(biāo)同源性相差可能會(huì)很大，抗體的特異性要求比較高，不同種屬樣本與抗體結(jié)合能力會(huì)有很大差別。

A：通常我們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類(lèi)型的，包括血清、血漿、細(xì)胞上清等常規(guī)樣品，而對(duì)于尿液、細(xì)組織勻漿液、細(xì)胞裂解液等樣品，目前市面上很多廠家的產(chǎn)品都沒(méi)有相關(guān)的驗(yàn)證數(shù)據(jù)，理論上可以檢測(cè)，客戶(hù)如有需要可以自行測(cè)試。需要注意的是，不同類(lèi)型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。樣品中含有影響生物活性的物質(zhì)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

A：ELISA試劑盒對(duì)于溫度的要求比較嚴(yán)格，溫度是ELISA結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素，這樣做主要是為了使試劑溫度一致，在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地滿(mǎn)足測(cè)定要求。

A：樣本收集后24之內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，放在4℃冰箱即可。如果樣本收集后不能立即檢測(cè)，需將樣本置于低溫冰箱中，樣本3個(gè)月內(nèi)檢測(cè)可于-20℃保存，若需存放時(shí)間更久，需要-80℃冰箱保存。

A：樣品反復(fù)凍融對(duì)蛋白影響非常大，能導(dǎo)致蛋白降解，非常不建議反復(fù)凍融樣品。一般蛋白含量豐富的樣本例如血清/血漿反復(fù)凍融1-2次，對(duì)于檢測(cè)結(jié)果影響不是非常大，但是其他類(lèi)型的樣本，例如細(xì)胞上清液、肺泡灌洗液，反復(fù)凍融會(huì)使蛋白降解嚴(yán)重，對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響非常大。

A：稀釋后的生物素化抗體和酶結(jié)合物建議在當(dāng)天用完，放置時(shí)間太長(zhǎng)可能會(huì)影響其活性?？筛鶕?jù)自己實(shí)驗(yàn)所需用量進(jìn)行配制，不建議過(guò)量配制。

索萊寶ELISA試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì) 

精選原料：國(guó)外血統(tǒng)，多級(jí)篩選，品質(zhì)；

技術(shù)工藝：專(zhuān)業(yè)制造，嚴(yán)格執(zhí)行全面規(guī)范的SOP；

嚴(yán)格質(zhì)控：批批質(zhì)檢，數(shù)據(jù)真實(shí)，可追溯與重復(fù)；

種類(lèi)齊全：400+小物種，500+常見(jiàn)物種，共1000多種；

應(yīng)用廣泛：檢測(cè)分析物全面覆蓋癌癥，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等各領(lǐng)域；

性能：線性范圍廣，高靈敏度，高特異性，高重復(fù)性，高均一性；

品質(zhì)：與國(guó)外進(jìn)口同類(lèi)產(chǎn)品平行性高，符合率≥99.95%。